Liberación de protoplastos, reconstitución de la pared celular, proliferación del callo en tejidos de callo de Coffea arabica L.

Liberación de protoplastos, reconstitución de la pared celular, proliferación del callo en tejidos de callo de Coffea arabica L.

Uma metodologia para liberação e cultura de protoplastos de tecidos de café foi definida a fin de permitir a possibilidade de manipulação genética dentro do genero Coffea. Uma combinação de 2,5% Pectinase, 3,5 por cento, Driselase, 0,51 molal manitol e 6 IM CaCl, em pH 5,5 foi considerada ótima para...

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Bibliographic Details
Main Authors: Sondahl, M.R, Chapman, M.S, Sharp, W.R
Format: Artículo
Language:Inglés
Published: Instituto Interamericano de Cooperación para la Agricultura (IICA) 2023
Subjects:
Coffea arabica||Coffea arabica||Coffea arabica||Coffea arabica
Protoplastos||protoplasts||protoplasto||protoplaste
Pared celular||cell walls||parede celular||paroi cellulaire
Manipulación genética
Sede Central
Online Access:https://repositorio.catie.ac.cr/handle/11554/12251
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spelling RepoCATIE122512023-10-21T17:23:20Z Liberación de protoplastos, reconstitución de la pared celular, proliferación del callo en tejidos de callo de Coffea arabica L. Protoplast liberation, cell wall reconstitution, and callus proliferation in Coffea arabica L. callus tissues. Sondahl, M.R Chapman, M.S Sharp, W.R Coffea arabica||Coffea arabica||Coffea arabica||Coffea arabica Protoplastos||protoplasts||protoplasto||protoplaste Pared celular||cell walls||parede celular||paroi cellulaire Manipulación genética Sede Central Uma metodologia para liberação e cultura de protoplastos de tecidos de café foi definida a fin de permitir a possibilidade de manipulação genética dentro do genero Coffea. Uma combinação de 2,5% Pectinase, 3,5 por cento, Driselase, 0,51 molal manitol e 6 IM CaCl, em pH 5,5 foi considerada ótima para liberação de protoplastos de células de calos de café após 7 horas de incubação a 50 rpm. A preparação de protoplastos foi pirificada por filtração através duas peneiras de aço inoxidável de 150 e 38 um. O filtrato foi coletado em tubos de centrifuga, centrifugado a 100 g por 3 min, o supernadante foi removido e o pellet de protoplastos foi resuspenso em 3 ml de meio de reseneração de parede. Esta rotina foi repetida tres vez para diluir os enzimas e eliminar or debris celulares. Finalmente, o pellet foi resuspenso em 1 - 2,5 ml de meio de regeneração de parede para atiingir uma densidade de 10°5 protoplas 105/ml. Suspensões de protoplastos de 0,5 ml foram cultivadas em placas de cultura contendo multipas divisões em condicões de luz difusa e alta humidade. Após 5 dias, o meio de regeneração de parede foi diluido com o meio de crescinento e a regeneração de parede celular em protoplastos foi observada com 0 uso de Calcoflror 0,1 por cento sob microscópio fluorescente. A regeneração de parede celular e a proliferação de calos foram observados em cerca de 30 por cento das culturas. 2023-10-10T18:06:23Z 2023-10-10T18:06:23Z 1980-04 Artículo https://repositorio.catie.ac.cr/handle/11554/12251 openAccess en Turrialba; Vol. 30, no. 2 6 páginas application/pdf Instituto Interamericano de Cooperación para la Agricultura (IICA)
institution Centro Agronómico Tropical de Investigación y Enseñanza
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Sondahl, M.R
Chapman, M.S
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Liberación de protoplastos, reconstitución de la pared celular, proliferación del callo en tejidos de callo de Coffea arabica L.
description Uma metodologia para liberação e cultura de protoplastos de tecidos de café foi definida a fin de permitir a possibilidade de manipulação genética dentro do genero Coffea. Uma combinação de 2,5% Pectinase, 3,5 por cento, Driselase, 0,51 molal manitol e 6 IM CaCl, em pH 5,5 foi considerada ótima para liberação de protoplastos de células de calos de café após 7 horas de incubação a 50 rpm. A preparação de protoplastos foi pirificada por filtração através duas peneiras de aço inoxidável de 150 e 38 um. O filtrato foi coletado em tubos de centrifuga, centrifugado a 100 g por 3 min, o supernadante foi removido e o pellet de protoplastos foi resuspenso em 3 ml de meio de reseneração de parede. Esta rotina foi repetida tres vez para diluir os enzimas e eliminar or debris celulares. Finalmente, o pellet foi resuspenso em 1 - 2,5 ml de meio de regeneração de parede para atiingir uma densidade de 10°5 protoplas 105/ml. Suspensões de protoplastos de 0,5 ml foram cultivadas em placas de cultura contendo multipas divisões em condicões de luz difusa e alta humidade. Após 5 dias, o meio de regeneração de parede foi diluido com o meio de crescinento e a regeneração de parede celular em protoplastos foi observada com 0 uso de Calcoflror 0,1 por cento sob microscópio fluorescente. A regeneração de parede celular e a proliferação de calos foram observados em cerca de 30 por cento das culturas.
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