Producción y purificación de osteopontina bovina recombinante mediante Escherichia coli como fábrica celular

Los programas de reproducción y mejoramiento animal requieren la optimización de herramientas biotecnológicas capaces de favorecer los índices reproductivos en diversas especies. El uso de aditivos proteicos que mejoren la criopreservación espermática y la producción de embriones in vitro, parec...

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Main Authors:	Brijaldo Villamizar, Angela Patricia, Londoño Méndez, María Camila, Arbeláez Ramírez, Luis Fernando, Rueda Alfonso, Fabian Leonardo
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Language:	Español
Published:	Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia 2024
Subjects:	Genética y mejoramiento animal - L10 Reproducción animal Proteínas recombinantes Semen Criopreservación Ganadería y especies menores http://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_5d5904a8 http://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_36920 http://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_6961 http://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_24155
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description	Los programas de reproducción y mejoramiento animal requieren la optimización de herramientas biotecnológicas capaces de favorecer los índices reproductivos en diversas especies. El uso de aditivos proteicos que mejoren la criopreservación espermática y la producción de embriones in vitro, parece ser una alternativa interesante. La Osteopontina se ha relacionado con el potencial fecundante del espermatozoide y con el desarrollo embrionario temprano. El objetivo de este trabajo fue determinar las condiciones óptimas para la producción de Osteopontina recombinante (rOPN) mediante el uso de Escherichia coli como fábrica celular. Para esto, el gen de la OPN se insertó en un vector de expresión pET28(a+) inducible por IPTG, con resistencia a la Kanamicina y una cola de histidinas (6xHis-tag). El constructo resultante se usó para transformar células competentes de E. Coli BL21-StarTM. Las colonias transformadas se usaron para la producción de rOPN-H6 a 20, 30 y 37 °C, probándose dos concentraciones del inductor IPTG (1.0 y 0.1mM). Se realizó una purificación de la rOPN-H6 mediante columnas de afinidad con imidazol (10, 50, 200, 350, 500mM). Los resultados evidenciaron que la producción de rOPN-H6 solo fue exitosa a 37°C independiente de la concentración de IPTG empleada. La purificación de la rOPN-H6 fue exitosa usando imidazol a 200mM, con una aparente tendencia a la dimerización luego de obtener la proteína purificada. De este modo, se concluye cuáles son las mejores condiciones para obtener la OPN recombinante, sugiriendo su potencial uso en ensayos de criopreservación espermática y en medios de cultivo para producción de embriones in vitro.
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El uso de aditivos proteicos que mejoren la criopreservación espermática y la producción de embriones in vitro, parece ser una alternativa interesante. La Osteopontina se ha relacionado con el potencial fecundante del espermatozoide y con el desarrollo embrionario temprano. El objetivo de este trabajo fue determinar las condiciones óptimas para la producción de Osteopontina recombinante (rOPN) mediante el uso de Escherichia coli como fábrica celular. Para esto, el gen de la OPN se insertó en un vector de expresión pET28(a+) inducible por IPTG, con resistencia a la Kanamicina y una cola de histidinas (6xHis-tag). El constructo resultante se usó para transformar células competentes de E. Coli BL21-StarTM. Las colonias transformadas se usaron para la producción de rOPN-H6 a 20, 30 y 37 °C, probándose dos concentraciones del inductor IPTG (1.0 y 0.1mM). Se realizó una purificación de la rOPN-H6 mediante columnas de afinidad con imidazol (10, 50, 200, 350, 500mM). Los resultados evidenciaron que la producción de rOPN-H6 solo fue exitosa a 37°C independiente de la concentración de IPTG empleada. La purificación de la rOPN-H6 fue exitosa usando imidazol a 200mM, con una aparente tendencia a la dimerización luego de obtener la proteína purificada. De este modo, se concluye cuáles son las mejores condiciones para obtener la OPN recombinante, sugiriendo su potencial uso en ensayos de criopreservación espermática y en medios de cultivo para producción de embriones in vitro. Ganadería bovina 2024-01-18T15:51:42Z 2024-01-18T15:51:42Z 2022-05-03 2022 article Artículo científico http://purl.org/coar/resource_type/c_2df8fbb1 info:eu-repo/semantics/article https://purl.org/redcol/resource_type/ART http://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85 https://revistas.uptc.edu.co/index.php/ciencia_agricultura/article/view/14071 0122-8420 http://hdl.handle.net/20.500.12324/38763 10.19053/01228420.v19.n2.2022.14071 reponame:Biblioteca Digital Agropecuaria de Colombia instname:Corporación colombiana de investigación agropecuaria AGROSAVIA spa Revista Ciencia y Agricultura 19 2 47 63 Alvarez-gallardo, H., Kjelland, M. E., Moreno, J. F., Jr, T. H. W., Lara-sagaho, A. V, Randel, R. D., Lammoglia, M. A., Pe, M., Romo, S., & Espero, E. (2013). Gamete Therapeutics : Recombinant Protein Adsorption by Sperm for Increasing Fertility via Artificial Insemination. 8(6). https://doi.org/10.1371/journal.pone.0065083. Barrios, B., Pe, R., Gallego, M., Muin, T., & Cebria, A. (2000). 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Producción y purificación de osteopontina bovina recombinante mediante Escherichia coli como fábrica celular

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