Producción y purificación de osteopontina bovina recombinante mediante Escherichia coli como fábrica celular
Los programas de reproducción y mejoramiento animal requieren la optimización de herramientas biotecnológicas capaces de favorecer los índices reproductivos en diversas especies. El uso de aditivos proteicos que mejoren la criopreservación espermática y la producción de embriones in vitro, parec...
| Autores principales: | , , , |
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| Formato: | article |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia
2024
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | https://revistas.uptc.edu.co/index.php/ciencia_agricultura/article/view/14071 http://hdl.handle.net/20.500.12324/38763 |
| Sumario: | Los programas de reproducción y mejoramiento animal
requieren la optimización de herramientas biotecnológicas capaces
de favorecer los índices reproductivos en diversas especies. El uso de
aditivos proteicos que mejoren la criopreservación espermática y la
producción de embriones in vitro, parece ser una alternativa interesante. La Osteopontina se ha relacionado con el potencial fecundante del espermatozoide y con el desarrollo embrionario temprano. El
objetivo de este trabajo fue determinar las condiciones óptimas para
la producción de Osteopontina recombinante (rOPN) mediante el uso
de Escherichia coli como fábrica celular. Para esto, el gen de la OPN
se insertó en un vector de expresión pET28(a+) inducible por IPTG,
con resistencia a la Kanamicina y una cola de histidinas (6xHis-tag).
El constructo resultante se usó para transformar células competentes
de E. Coli BL21-StarTM. Las colonias transformadas se usaron para la
producción de rOPN-H6 a 20, 30 y 37 °C, probándose dos concentraciones del inductor IPTG (1.0 y 0.1mM). Se realizó una purificación
de la rOPN-H6 mediante columnas de afinidad con imidazol (10, 50,
200, 350, 500mM). Los resultados evidenciaron que la producción de
rOPN-H6 solo fue exitosa a 37°C independiente de la concentración de
IPTG empleada. La purificación de la rOPN-H6 fue exitosa usando imidazol a 200mM, con una aparente tendencia a la dimerización luego de
obtener la proteína purificada. De este modo, se concluye cuáles son
las mejores condiciones para obtener la OPN recombinante, sugiriendo su potencial uso en ensayos de criopreservación espermática y en
medios de cultivo para producción de embriones in vitro. |
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