Evaluación de la técnica de amplificación por recombinasa y polimerasa (RPA) para la detección de begomovirus presentes en cultivos de soja y poroto en Argentina = Evaluation of the RPA technique for the detection of begomoviruses present in soybean and bean crops in Argentina
Los métodos tradicionales de diagnóstico son inespecíficos para la identificación de begomovirus. Actualmente se usan técnicas moleculares, que requieren equipamientos sofisticados o procedimientos complejos. La técnica de amplificación mediante recombinasa y polimerasa (RPA) es similar a la rea...
| Autores principales: | , |
|---|---|
| Formato: | Artículo |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Nacional de Córdoba
2019
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | http://hdl.handle.net/20.500.12123/4642 https://revistas.unc.edu.ar/index.php/agris/article/view/19319 http://dx.doi.org/10.31047/1668.298x.v35.n2.19319 |
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| author | Reyna, Pablo Gastón Rodriguez Pardina, Patricia |
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| description | Los métodos tradicionales de diagnóstico son inespecíficos para la
identificación de begomovirus. Actualmente se usan técnicas moleculares, que
requieren equipamientos sofisticados o procedimientos complejos. La técnica
de amplificación mediante recombinasa y polimerasa (RPA) es similar a la
reacción en cadena de la polimerasa (PCR), sensible, específica, pero opera
a temperatura constante. Con el fin de evaluar la utilización de esta técnica
para la detección de begomovirus presentes en soja y poroto en Argentina,
se diseñaron iniciadores específicos. Se probaron inicialmente por PCR, con
clones de virus detectados en el país, y se logró amplificar una banda de 371
pb. La RPA se llevó a cabo con el Twist Amp® Basic kit utilizando muestras
de soja y poroto, sanas y enfermas y malezas infectadas. Se probaron dos
métodos de conservación de muestras: hojas liofilizadas y hojas mantenidas
a -70 ºC; y dos de obtención de ADN: CTAB y molido de la muestra en 0,5M
OHNa. La reacción se incubó a 37 ºC durante 30 min, y luego a 65 ºC durante10
min. Se visualizaron bandas del tamaño esperado en plantas infectadas y no
en testigos sanos. No hubo diferencias según los métodos de conservación
de material ni con los de extracción de ADN utilizados. Se logró ajustar la RPA
para la detección de begomovirus en cultivos de soja y poroto de Argentina. |
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| spelling | INTA46422019-03-18T17:15:01Z Evaluación de la técnica de amplificación por recombinasa y polimerasa (RPA) para la detección de begomovirus presentes en cultivos de soja y poroto en Argentina = Evaluation of the RPA technique for the detection of begomoviruses present in soybean and bean crops in Argentina Reyna, Pablo Gastón Rodriguez Pardina, Patricia Soja Glycine Max Fríjol (Phaseolus) Phaseolus Vulgaris Begomovirus Soybeans Kidney Beans Amplificación Mediante Polimerasa Recombinasa Argentina Recombinase Polymerase Amplification Los métodos tradicionales de diagnóstico son inespecíficos para la identificación de begomovirus. Actualmente se usan técnicas moleculares, que requieren equipamientos sofisticados o procedimientos complejos. La técnica de amplificación mediante recombinasa y polimerasa (RPA) es similar a la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), sensible, específica, pero opera a temperatura constante. Con el fin de evaluar la utilización de esta técnica para la detección de begomovirus presentes en soja y poroto en Argentina, se diseñaron iniciadores específicos. Se probaron inicialmente por PCR, con clones de virus detectados en el país, y se logró amplificar una banda de 371 pb. La RPA se llevó a cabo con el Twist Amp® Basic kit utilizando muestras de soja y poroto, sanas y enfermas y malezas infectadas. Se probaron dos métodos de conservación de muestras: hojas liofilizadas y hojas mantenidas a -70 ºC; y dos de obtención de ADN: CTAB y molido de la muestra en 0,5M OHNa. La reacción se incubó a 37 ºC durante 30 min, y luego a 65 ºC durante10 min. Se visualizaron bandas del tamaño esperado en plantas infectadas y no en testigos sanos. No hubo diferencias según los métodos de conservación de material ni con los de extracción de ADN utilizados. Se logró ajustar la RPA para la detección de begomovirus en cultivos de soja y poroto de Argentina. Traditional diagnostic methods are non-specific for begomovirus identification. At present molecular techniques are used, which require sophisticated equipment or complex procedures. The Recombinase polymerase amplification technique (RPA) is similar to the Polymerase chain reaction (PCR), sensitive and specific, but operates at constant temperature. In order to evaluate the use of this technique for the detection of begomovirus present in soybeans and beans in Argentina, specific primers were designed. They were initially tested by PCR, using clones of the different begomoviruses detected in our country and a 371pb band was successfully amplified. RPA was carried out using the Twist AMP ® Basic Kitto test soybean, bean and weed infected samples, as well as healthy soybean and bean controls. Two conservation methods were tested: lyophilized leaves and leaves maintained at-70 ºC; and two DNA extraction methods: CTAB and crude extract grounded in OHNa 0.5M. The reaction was incubated at 37 ºC/30 min. and at 65 ºC/10 min. Bands of the expected size were visualized in infected samples, and not in healthy controls. There were no differences in the results due to either method of conservation or DNA extraction. RPA technique was successfully optimized for the detection of begomoviruses infecting soybean and bean crops of Argentina. Instituto de Patología Vegetal Fil: Reyna, Pablo Gastón. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Concejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Rodriguez Pardina, Patricia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patología Vegetal; Argentina 2019-03-18T17:06:03Z 2019-03-18T17:06:03Z 2018 info:ar-repo/semantics/artículo info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion http://hdl.handle.net/20.500.12123/4642 https://revistas.unc.edu.ar/index.php/agris/article/view/19319 1668-298X (Online) http://dx.doi.org/10.31047/1668.298x.v35.n2.19319 spa info:eu-repo/semantics/openAccess http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International (CC BY-NC-SA 4.0) application/pdf Argentina (nation) Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Nacional de Córdoba Agriscientia 35 (2) : 35-42. (2018) |
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