Evaluación de la técnica de amplificación por recombinasa y polimerasa (RPA) para la detección de begomovirus presentes en cultivos de soja y poroto en Argentina = Evaluation of the RPA technique for the detection of begomoviruses present in soybean and bean crops in Argentina
Los métodos tradicionales de diagnóstico son inespecíficos para la identificación de begomovirus. Actualmente se usan técnicas moleculares, que requieren equipamientos sofisticados o procedimientos complejos. La técnica de amplificación mediante recombinasa y polimerasa (RPA) es similar a la rea...
| Autores principales: | , |
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| Formato: | Artículo |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Nacional de Córdoba
2019
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | http://hdl.handle.net/20.500.12123/4642 https://revistas.unc.edu.ar/index.php/agris/article/view/19319 http://dx.doi.org/10.31047/1668.298x.v35.n2.19319 |
| Sumario: | Los métodos tradicionales de diagnóstico son inespecíficos para la
identificación de begomovirus. Actualmente se usan técnicas moleculares, que
requieren equipamientos sofisticados o procedimientos complejos. La técnica
de amplificación mediante recombinasa y polimerasa (RPA) es similar a la
reacción en cadena de la polimerasa (PCR), sensible, específica, pero opera
a temperatura constante. Con el fin de evaluar la utilización de esta técnica
para la detección de begomovirus presentes en soja y poroto en Argentina,
se diseñaron iniciadores específicos. Se probaron inicialmente por PCR, con
clones de virus detectados en el país, y se logró amplificar una banda de 371
pb. La RPA se llevó a cabo con el Twist Amp® Basic kit utilizando muestras
de soja y poroto, sanas y enfermas y malezas infectadas. Se probaron dos
métodos de conservación de muestras: hojas liofilizadas y hojas mantenidas
a -70 ºC; y dos de obtención de ADN: CTAB y molido de la muestra en 0,5M
OHNa. La reacción se incubó a 37 ºC durante 30 min, y luego a 65 ºC durante10
min. Se visualizaron bandas del tamaño esperado en plantas infectadas y no
en testigos sanos. No hubo diferencias según los métodos de conservación
de material ni con los de extracción de ADN utilizados. Se logró ajustar la RPA
para la detección de begomovirus en cultivos de soja y poroto de Argentina. |
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