Clonación y expresión del gen sintético de la neurotoxina recombinante específica para insectos del Androctonus australis Hector (AaHIT) en Escherichia coli
La toxinología y la recombinación con fines biotecnológicos ha tomado importancia por los múltiples hallazgos e impactos en farmacia, agricultura y para reducir el impacto ambiental antropogénico. La AaHIT es una neurotoxina polipéptidica de 65-70 residuos de aminoácidos específica para insectos y p...
| Autor principal: | |
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| Otros Autores: | |
| Formato: | Tesis |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Zamorano: Escuela Agrícola Panamericana, 2016
2016
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| Materias: | |
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| description | La toxinología y la recombinación con fines biotecnológicos ha tomado importancia por los múltiples hallazgos e impactos en farmacia, agricultura y para reducir el impacto ambiental antropogénico. La AaHIT es una neurotoxina polipéptidica de 65-70 residuos de aminoácidos específica para insectos y producida por el Androctonus autralis. El objetivo de este estudio fue el diseño, clonación, estandarización y transformación de las cepas de Escherichia coli DH5α y BL21 con la secuencias sintética de AaHIT y GFP. Esta secuencia formulada tiene un promotor regulado por IPTG para las secuencias de interés GFP y la AaHIT. La construcción se sintetizó y se clonó en el plásmido pUC57. La inducción para la producción de AaHIT mediante la activación del promotor regulado por IPTG se evaluó a 31° C y 37° C, pero no se encontró diferencias en la expresión. La transformación con el vector pUC57 fue positiva y se denota con la presencia del inserto por resistencia a medio con ampicilina. Mediante electroforesis en geles de poliacrilamida SDS-PAGE se verificó la producción proteína reportera GFP de 37 kDa y a simple vista se corroboró la fluorescencia verde en las dos cepas, sin embargo, la intensidad y presencia fue mayor en las cepas de DH5α. En cuanto a la AaHIT recombinante no se observó la banda esperada de 7kDa. |
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| spelling | ZAMORANO58412023-03-24T15:38:54Z Clonación y expresión del gen sintético de la neurotoxina recombinante específica para insectos del Androctonus australis Hector (AaHIT) en Escherichia coli Fuentes C., Ediner J. Aguilar, Estela Boully, Ludovic Montiel, Dvorak Biología sintética Biotecnología ambiental Toxinología La toxinología y la recombinación con fines biotecnológicos ha tomado importancia por los múltiples hallazgos e impactos en farmacia, agricultura y para reducir el impacto ambiental antropogénico. La AaHIT es una neurotoxina polipéptidica de 65-70 residuos de aminoácidos específica para insectos y producida por el Androctonus autralis. El objetivo de este estudio fue el diseño, clonación, estandarización y transformación de las cepas de Escherichia coli DH5α y BL21 con la secuencias sintética de AaHIT y GFP. Esta secuencia formulada tiene un promotor regulado por IPTG para las secuencias de interés GFP y la AaHIT. La construcción se sintetizó y se clonó en el plásmido pUC57. La inducción para la producción de AaHIT mediante la activación del promotor regulado por IPTG se evaluó a 31° C y 37° C, pero no se encontró diferencias en la expresión. La transformación con el vector pUC57 fue positiva y se denota con la presencia del inserto por resistencia a medio con ampicilina. Mediante electroforesis en geles de poliacrilamida SDS-PAGE se verificó la producción proteína reportera GFP de 37 kDa y a simple vista se corroboró la fluorescencia verde en las dos cepas, sin embargo, la intensidad y presencia fue mayor en las cepas de DH5α. En cuanto a la AaHIT recombinante no se observó la banda esperada de 7kDa. 2016-11-28T02:42:01Z 2016-11-28T02:42:01Z 2016 Thesis https://bdigital.zamorano.edu/handle/11036/5841 spa 29 p. Copyright, Escuela Agrícola Panamericana, 2016 http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es openAccess application/pdf application/pdf Zamorano Zamorano: Escuela Agrícola Panamericana, 2016 |
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