Optimización de un sistema de diagnóstico utilizando tarjetas FTA® y PCR en tiempo real para la detección del fitoplasma causante del Amarillamiento Letal del Cocotero

Castro A. A. 2010. Optimización de un sistema de diagnóstico utilizando tarjetas FTA® y PCR en tiempo real para la detección del fitoplasma causante del Amarillamiento Letal del Cocotero. Proyecto especial de graduación del programa de Ingeniería Agronómica. EAP, Zamorano. Honduras. 32 p. El Amarill...

Full description

Bibliographic Details
Main Author: Castro A., Alejandro
Other Authors: Roca, María
Format: Tesis
Language:Español
Published: Zamorano: Escuela Agrícola Panamericana, 2012 2012
Subjects:
ADN
ALC
Online Access:https://bdigital.zamorano.edu/handle/11036/581
id ZAMORANO581
record_format dspace
spelling ZAMORANO5812023-03-24T15:58:31Z Optimización de un sistema de diagnóstico utilizando tarjetas FTA® y PCR en tiempo real para la detección del fitoplasma causante del Amarillamiento Letal del Cocotero Castro A., Alejandro Roca, María Aguilar, Estela Rosas, Juan C. Pitty, Abelino ADN ALC Extracción Métodos Tejidos Castro A. A. 2010. Optimización de un sistema de diagnóstico utilizando tarjetas FTA® y PCR en tiempo real para la detección del fitoplasma causante del Amarillamiento Letal del Cocotero. Proyecto especial de graduación del programa de Ingeniería Agronómica. EAP, Zamorano. Honduras. 32 p. El Amarillamiento Letal del Cocotero (ALC), una enfermedad causada por el fitoplasma Candidatus Phytoplasma palmarum, es el principal responsable de la alta mortalidad de cocoteros en muchos países del continente Americano y Africano. Variedades tolerantes han mostrado una preocupante erosión de la resistencia genética a la enfermedad. No existe ninguna cura o aplicación química de manejo, y una práctica común para manejar el ALC en plantaciones y zonas afectadas, es el corte y la quema de palmas infectadas para disminuir el inoculo. Antes de cortar una palma con síntomas y las palmas asintomáticas colindantes que ya pueden albergar el patógeno, es necesario confirmar la infeccion por el ALC. Este estudio buscó la selección de la mejor prueba de diagnóstico para el ALC, tomando en cuenta los factores como reproducibilidad, especificidad, y sensibilidad. Se validaron los parámetros considerados críticos para la cinética de la reacción de PCR utilizada convencionalmente para el diagnóstico del ALC. Estos incluyen la toma de muestra de la palma, el almacenamiento del tejido, la extracción del ADN total de la muestra, la amplificación del ADN del patógeno (copia del gen marcador por PCR), la visualización del ADN y la interpretación de resultados (falsos positivos y negativos). Se validaron nuevas tecnologías de toma de muestras y almacenamiento con tarjetas FTA®, y la amplificación del ADN del patógeno por PCR en tiempo real (RT-PCR por sus siglas en inglés). El RT-PCR es una tecnología mejorada y de segunda generación, comparada al PCR convencional. El estudio estableció que el uso de tarjetas FTA® para la toma y almacenamiento de muestras es el más eficiente, ya que elimina la necesidad de extracción de ADN con compuestos tóxicos como el mercaptoetanol, un antioxidante para proteger el ADN, utilizado en los buffers de extracción convencional. Asimismo, la técnica de RT-PCR con SYBRGreen fue seleccionada como la mejor para la amplificación del ADN. Comparada con el PCR convencional, el RT-PCR es una prueba menos costosa para análisis de ADN, es cualitativa y cuantitativa ya que mide la concentración del ADN amplificado, y reduce el tiempo del proceso por tener ciclos más cortos de amplificación del ADN y por eliminar toda la fase de electroforesis. 1. Índice de cuadros, figuras y anexos 2. Introducción 3. Materiales y métodos 4. Resultados y discusión 5. Conclusiones 6. Recomendaciones 7. Literatura citada 8. Anexos 2012-10-22T01:36:26Z 2012-10-22T01:36:26Z 2010 Thesis https://bdigital.zamorano.edu/handle/11036/581 spa 32 p. Copyright Escuela Agrícola Panamericana El Zamorano 2012 http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es openAccess application/pdf application/pdf Zamorano Zamorano: Escuela Agrícola Panamericana, 2012
institution Universidad Zamorano
collection Biblioteca Digital Zamorano
language Español
topic ADN
ALC
Extracción
Métodos
Tejidos
spellingShingle ADN
ALC
Extracción
Métodos
Tejidos
Castro A., Alejandro
Optimización de un sistema de diagnóstico utilizando tarjetas FTA® y PCR en tiempo real para la detección del fitoplasma causante del Amarillamiento Letal del Cocotero
description Castro A. A. 2010. Optimización de un sistema de diagnóstico utilizando tarjetas FTA® y PCR en tiempo real para la detección del fitoplasma causante del Amarillamiento Letal del Cocotero. Proyecto especial de graduación del programa de Ingeniería Agronómica. EAP, Zamorano. Honduras. 32 p. El Amarillamiento Letal del Cocotero (ALC), una enfermedad causada por el fitoplasma Candidatus Phytoplasma palmarum, es el principal responsable de la alta mortalidad de cocoteros en muchos países del continente Americano y Africano. Variedades tolerantes han mostrado una preocupante erosión de la resistencia genética a la enfermedad. No existe ninguna cura o aplicación química de manejo, y una práctica común para manejar el ALC en plantaciones y zonas afectadas, es el corte y la quema de palmas infectadas para disminuir el inoculo. Antes de cortar una palma con síntomas y las palmas asintomáticas colindantes que ya pueden albergar el patógeno, es necesario confirmar la infeccion por el ALC. Este estudio buscó la selección de la mejor prueba de diagnóstico para el ALC, tomando en cuenta los factores como reproducibilidad, especificidad, y sensibilidad. Se validaron los parámetros considerados críticos para la cinética de la reacción de PCR utilizada convencionalmente para el diagnóstico del ALC. Estos incluyen la toma de muestra de la palma, el almacenamiento del tejido, la extracción del ADN total de la muestra, la amplificación del ADN del patógeno (copia del gen marcador por PCR), la visualización del ADN y la interpretación de resultados (falsos positivos y negativos). Se validaron nuevas tecnologías de toma de muestras y almacenamiento con tarjetas FTA®, y la amplificación del ADN del patógeno por PCR en tiempo real (RT-PCR por sus siglas en inglés). El RT-PCR es una tecnología mejorada y de segunda generación, comparada al PCR convencional. El estudio estableció que el uso de tarjetas FTA® para la toma y almacenamiento de muestras es el más eficiente, ya que elimina la necesidad de extracción de ADN con compuestos tóxicos como el mercaptoetanol, un antioxidante para proteger el ADN, utilizado en los buffers de extracción convencional. Asimismo, la técnica de RT-PCR con SYBRGreen fue seleccionada como la mejor para la amplificación del ADN. Comparada con el PCR convencional, el RT-PCR es una prueba menos costosa para análisis de ADN, es cualitativa y cuantitativa ya que mide la concentración del ADN amplificado, y reduce el tiempo del proceso por tener ciclos más cortos de amplificación del ADN y por eliminar toda la fase de electroforesis.
author2 Roca, María
author_facet Roca, María
Castro A., Alejandro
format Tesis
author Castro A., Alejandro
author_sort Castro A., Alejandro
title Optimización de un sistema de diagnóstico utilizando tarjetas FTA® y PCR en tiempo real para la detección del fitoplasma causante del Amarillamiento Letal del Cocotero
title_short Optimización de un sistema de diagnóstico utilizando tarjetas FTA® y PCR en tiempo real para la detección del fitoplasma causante del Amarillamiento Letal del Cocotero
title_full Optimización de un sistema de diagnóstico utilizando tarjetas FTA® y PCR en tiempo real para la detección del fitoplasma causante del Amarillamiento Letal del Cocotero
title_fullStr Optimización de un sistema de diagnóstico utilizando tarjetas FTA® y PCR en tiempo real para la detección del fitoplasma causante del Amarillamiento Letal del Cocotero
title_full_unstemmed Optimización de un sistema de diagnóstico utilizando tarjetas FTA® y PCR en tiempo real para la detección del fitoplasma causante del Amarillamiento Letal del Cocotero
title_sort optimización de un sistema de diagnóstico utilizando tarjetas fta® y pcr en tiempo real para la detección del fitoplasma causante del amarillamiento letal del cocotero
publisher Zamorano: Escuela Agrícola Panamericana, 2012
publishDate 2012
url https://bdigital.zamorano.edu/handle/11036/581
work_keys_str_mv AT castroaalejandro optimizaciondeunsistemadediagnosticoutilizandotarjetasftaypcrentiemporealparaladetecciondelfitoplasmacausantedelamarillamientoletaldelcocotero
_version_ 1808119058571198464