| Sumario: | El mal seco causado por Pythium myriotylum Drechsler es la enfermedad más destructiva del quequisque, éste persiste en el suelo por muchos años. Los métodos para su aislamiento han sido muy laboriosos, por lo que se deben buscar técnicas de aislamiento y medios selectivos utilizando eficientemente los reactivos para la obtención de cultivo puro del patógeno. Se utilizaron tres métodos de aislamiento de Pythium a partir de hojas de quequisque como cebos (HQC), raíces infectadas (RS) y diluciones de suelo (DS); en los medios de cultivos Agar agua + sulfato de estreptomicina (AA+SE), Papa Dextrosa Agar (PDA) y V8 + Piramicina, Ampicilina, Rifampicina y Benomil (PARB) y el medio Cloruro de tetrazolio (TZC), para bacterias. Para cada método de aislamiento se usaron 20 platos por medio y 5 hojas-cebos o raíces por plato. La identificación morfo-métrica de los microorganismos aislados, se realizó usando claves taxonómicas La patogenicidad; consistió en la inoculación al sustrato estéril los diferentes aislados patogénicos. Se evaluaron siete tratamientos y un testigo en 15 plantas obtenidas in vitro por tratamiento, en el cultivar de quequisque Lila. Los síntomas en hojas, severidad en raíces y variables de crecimiento se realizó a los 7, 21 y 35 días después de la inoculación (ddi) Los patógenos aislados fueron Pythium myriotylum, Fusarium solani y Ralstonia solanancearum. Pythium spp., desarrolló mejor crecimiento micelial y producción de sus estructuras fructíferas con el método HQC y en el medio de cultivo V8 + PARB. Fusarium spp. desarrolló mejor en el método de DS y en el medio de cultivo PDA. La patogenicidad de P. myriohtylum se observó desde los siete hasta los 35 ddi, mostrando diferencias significativas en todas las variables evaluadas con excepción de largo de raíces. La severidad en raíces en los tratamientos donde se encontraba P. myriothylum, mostraron mayor número de raíces necróticas y marchitamiento radicular, considerándose el agente causal del mal seco en quequisque.
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