Comparación de metodologías para la purificación de proteínas de membrana externa de Brucella abortus

Las proteínas de la membrana externa de la Brucella abortus, Cepa 19 y RB-51 se purificaron por dos métodos, el primero basado en la extracción secuencial por tratamientos sucesivos con detergentes y lisozima y el segundo, en la formación del saco de peptidoglican con sus proteínas asociadas, utiliz...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autores principales:	Forero de Lleras, Claudia, Rueda de Clavijo, Esperanza, Deleón, Ligia S. de, Mariño, Olga C., Montes de Gómez, Virginia
Formato:	article
Lenguaje:	Español
Publicado:	Instituto Colombiano Agropecuario - ICA 2019
Materias:	Ganadería - L01 Vaca Membranas celulares Brucella abortus Ganadería y especies menores
Acceso en línea:	http://hdl.handle.net/20.500.12324/35399

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spelling	RepoAGROSAVIA353992024-06-21T03:00:17Z Comparación de metodologías para la purificación de proteínas de membrana externa de Brucella abortus Forero de Lleras, Claudia Rueda de Clavijo, Esperanza Deleón, Ligia S. de Mariño, Olga C. Montes de Gómez, Virginia Ganadería - L01 Vaca Membranas celulares Brucella abortus Ganadería y especies menores Las proteínas de la membrana externa de la Brucella abortus, Cepa 19 y RB-51 se purificaron por dos métodos, el primero basado en la extracción secuencial por tratamientos sucesivos con detergentes y lisozima y el segundo, en la formación del saco de peptidoglican con sus proteínas asociadas, utilizando dodecil sulfato de so-dio (SOS) a 50°C y extracción directa de las proteínas de la membrana externa con 50 mM de MgCl2 en SDS-23 Mercaptoetanol a 37°. Se utilizó la sonicacion para lograr la ruptura bacterial y su efecto se comprobó por microscopia electrónica. Las proteínas obtenidas se caracterizaron por electroforesis en geles de poliacrilamida. El método de extracción por detergentes aniònicos débiles y dipolares y tratamiento con lisozima, comprobó ser superior en calidad, selectividad y concentración de las proteínas de interés. Los pesos moleculares obtenidos para las proteínas denominadas porinas van de 37 a 41 kilo Daltons (k0), asi mismo se detecta una proteína de bajo peso molecular (14kI3). Se detecto reacción especifica de las proteínas en sueros controles de bovinos con infección natural de B. abortus por to técnica de inmunotransferencia en papel de nitrocelulosa. Outer membrane proteins of Bruce/la abortus strain 19 and strain RB-51 were purified using two methods. One based on sequential detergent extraction plus iysosyme treatment and the other obtaining peptidoglican saculae associated proteins by sodium dodecil sulfate (SDS) treatment at 50°C, and external protein extraction with SDS-23 mercaptoetanol, 50 mM MgCl2 at 37°C. Sonication was used in order to disrupt the cells and its effect was monitored by electron microscopy. The proteins were characterized by polycrilamide gel electrophoresis. Detergent and lysozyme treatment demonstrated superiority over SDS extraction regarding selectivity, antigenicity and yield. The proteins obtained from strain RB-51 had less LPS contamination. The molecular weights of the porin proteins obtained ranged between 37 and 41 kD, and a 14 kD protein was also detected. Specific reaction of the purified proteins was detected by western-blotting with positive bovine control serums. Ganado de leche-Ganadería leche 2019-09-06T00:52:08Z 2019-09-06T00:52:08Z 1990 article Artículo científico http://purl.org/coar/resource_type/c_2df8fbb1 info:eu-repo/semantics/article https://purl.org/redcol/resource_type/ART http://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85 0018-8794 http://hdl.handle.net/20.500.12324/35399 17608 reponame:Biblioteca Digital Agropecuaria de Colombia repourl:https://repository.agrosavia.co instname:Corporación colombiana de investigación agropecuaria AGROSAVIA spa Revista ICA 3 193 202 Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ Acceso a texto completo info:eu-repo/semantics/openAccess application/pdf application/pdf Cundinamarca Bogotá Colombia Instituto Colombiano Agropecuario - ICA Bogotá (Colombia) Revista ICA; Vol. 25, Núm. 3 (1990): Revista ICA Julio-Septiembre);p. 193-202
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