Aislamiento y purificación del virus X de la papa y clonación del gen de su cubierta proteica

"El objetivo principal de este trabajo fue obtener clones del gen que codifica la cubierta proteica (CP) del virus X de la papa (PVX). Para lograrlo se estudió un aislamiento colombiano del PVX obtenido de muestras de plantas de papa recolectadas en el páramo de San Jorge (CORPOICA). Después de...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autores principales:	Duplat, L., Acosta, Orlando, Peñaranda, J., Caro, M.
Formato:	article
Lenguaje:	Español
Publicado:	Universidad Nacional de Colombia 2018
Materias:	Plagas de las plantas - H10 Papa Enfermedades de las plantas Virus de las plantas Aislamiento Purificación Clonación molecular Identificación Técnicas analíticas Raíces y tubérculos
Acceso en línea:	http://hdl.handle.net/20.500.12324/16922

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spelling	RepoAGROSAVIA169222024-07-17T19:57:38Z Aislamiento y purificación del virus X de la papa y clonación del gen de su cubierta proteica Duplat, L. Acosta, Orlando Peñaranda, J. Caro, M. Plagas de las plantas - H10 Papa Enfermedades de las plantas Virus de las plantas Aislamiento Purificación Clonación molecular Identificación Técnicas analíticas Raíces y tubérculos "El objetivo principal de este trabajo fue obtener clones del gen que codifica la cubierta proteica (CP) del virus X de la papa (PVX). Para lograrlo se estudió un aislamiento colombiano del PVX obtenido de muestras de plantas de papa recolectadas en el páramo de San Jorge (CORPOICA). Después de la inoculación sobre Datura stramonium, se tomó una lesión local producida sobre este hospedero y se inoculó sobre Nicotina tabacum, de cuyo tejido se purificó el PVX. El RNA genómico extraido de las partículas virales purificadas presentó un tamaño de aproximadamente 6 Kb. La síntesis de cDNA, utilizando el primer 4DT/KPN, se evidenció mediante la incorporación de Digoxigenina. La amplificación por PCR del gen CP, a partir de cDNA sintetizado, se realizó utilizando el primer OX6 junto con el primer LK/pn, complementario a la secuencia del extremo 5´ del primer 4DT/KPN. El producto de la amplificación presentó el tamaño esperado de aproximadamente 870 pb, en adición a otros productos de 600-123pb. Estos fragmentos amplificados fueron clonados en el plásmido pMOS Blue. Los recombinantes fueron analizados en ""minipreps"", dirigiendo el plásmido con Sma I y Hind III o utilizando el método de amplificación con PCR directamente de la colonia. Las colonias transformadas con el inserto apropiado fueron almacenadas en glicerol a -70°C" Papa-Solanum tuberosum 2018-09-11T19:41:16Z 2018-09-11T19:41:16Z 2001 article Artículo científico http://purl.org/coar/resource_type/c_2df8fbb1 info:eu-repo/semantics/article https://purl.org/redcol/resource_type/ART http://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85 http://hdl.handle.net/20.500.12324/16922 27107 reponame:Biblioteca Digital Agropecuaria de Colombia repourl:https://repository.agrosavia.co instname:Corporación colombiana de investigación agropecuaria AGROSAVIA spa Revista Colombiana de Biotecnología 1 53 62 Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ Acceso a texto completo info:eu-repo/semantics/openAccess application/pdf application/pdf Colombia Universidad Nacional de Colombia Bogotá (Colombia) Revista Colombiana de Biotecnología; Vol. 3, Núm. 1 (2001): Revista Colombiana de Biotecnología (Julio);p. 53-62
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description	"El objetivo principal de este trabajo fue obtener clones del gen que codifica la cubierta proteica (CP) del virus X de la papa (PVX). Para lograrlo se estudió un aislamiento colombiano del PVX obtenido de muestras de plantas de papa recolectadas en el páramo de San Jorge (CORPOICA). Después de la inoculación sobre Datura stramonium, se tomó una lesión local producida sobre este hospedero y se inoculó sobre Nicotina tabacum, de cuyo tejido se purificó el PVX. El RNA genómico extraido de las partículas virales purificadas presentó un tamaño de aproximadamente 6 Kb. La síntesis de cDNA, utilizando el primer 4DT/KPN, se evidenció mediante la incorporación de Digoxigenina. La amplificación por PCR del gen CP, a partir de cDNA sintetizado, se realizó utilizando el primer OX6 junto con el primer LK/pn, complementario a la secuencia del extremo 5´ del primer 4DT/KPN. El producto de la amplificación presentó el tamaño esperado de aproximadamente 870 pb, en adición a otros productos de 600-123pb. Estos fragmentos amplificados fueron clonados en el plásmido pMOS Blue. Los recombinantes fueron analizados en ""minipreps"", dirigiendo el plásmido con Sma I y Hind III o utilizando el método de amplificación con PCR directamente de la colonia. Las colonias transformadas con el inserto apropiado fueron almacenadas en glicerol a -70°C"
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Aislamiento y purificación del virus X de la papa y clonación del gen de su cubierta proteica

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