Estandarización de un protocolo para obtención de inóculo inactivado de adenovirus aviar serotipos 4 y 8b en células LMH = Protocol standardization for obtaining inactivated inoculum of avian adenovirus serotypes 4 and 8b in LMH cells
Adenovirus aviar tipo 1 (FAdV) es considerado un patógeno de importancia para la industria avícola. Los serotipos 4 (FAdV-4) y 8b (FAdV-8b) son responsables de hepatitis por cuerpos de inclusión (IBH) y síndrome de hidropericardio (HHS) en pollos y son prevalentes en el Perú. El objetivo del present...
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Sociedad de Medicina Veterinaria, Argentina
2022
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| author | Flores Santos, Juan Carlos Quispe, Juana Huberman, Yosef Daniel Mendoza Espinoza, Alfredo Caballero García, Melanie |
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| description | Adenovirus aviar tipo 1 (FAdV) es considerado un patógeno de importancia para la industria avícola. Los serotipos 4 (FAdV-4) y 8b (FAdV-8b) son responsables de hepatitis por cuerpos de inclusión (IBH) y síndrome de hidropericardio (HHS) en pollos y son prevalentes en el Perú. El objetivo del presente trabajo fue establecer un protocolo estandarizado de obtención de inóculos virales inactivados de FAdV-4 y FAdV-8b producidos en células de hepatoma de pollo (LMH). Para ello, células LMH al 70 % de confluencia,crecidas en medio DMEM con 10 % de suero fetal bovino, fueron infectadas con FAdV-4 o FAdV-8b para evaluar el valor de multiplicidad de infección (MOI) y tiempo de cosecha óptimos. Luego, se realizó la producción de 1L de ambos serotipos considerando un MOI de 10 y tiempo de cosecha de 96 h post-infección (hpi). Seguidamente, ambas cosechas virales fueron clarificadas y concentradas mediante ultrafiltración tangencial (UFT) en membrana de 100kDa e inactivadas con 30mM de etilenimina binaria (BEI) a 37°C por 18 h. La pérdida de infectividad fue corroborada por el cálculo de dosis infecciosa del 50 % de cultivo de células (TCID50). Nuestros resultados mostraron que con un MOI de 10 y cosecha de 96 hpi se alcanzó el mayor título viral (> 1x108 TCID50/mL). Además, se mostró que la UFT permitió concentrar 10 veces la cantidad de virus con una recuperación del 91% y que la inactivación con BEI fue eficiente. Los inóculos inactivados obtenidos pueden ser utilizados en la formulación de una vacuna para prevenir IBH y HHS en pollos de forma segura. |
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| institution | Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA -Argentina) |
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| spelling | INTA128832023-04-03T11:44:30Z Estandarización de un protocolo para obtención de inóculo inactivado de adenovirus aviar serotipos 4 y 8b en células LMH = Protocol standardization for obtaining inactivated inoculum of avian adenovirus serotypes 4 and 8b in LMH cells Flores Santos, Juan Carlos Quispe, Juana Huberman, Yosef Daniel Mendoza Espinoza, Alfredo Caballero García, Melanie Aves Hepatitis Pathogens Protocols Inoculation Aviadenovirus Organismos Patógenos Protocolos Inoculación Adenovirus aviar tipo 1 (FAdV) es considerado un patógeno de importancia para la industria avícola. Los serotipos 4 (FAdV-4) y 8b (FAdV-8b) son responsables de hepatitis por cuerpos de inclusión (IBH) y síndrome de hidropericardio (HHS) en pollos y son prevalentes en el Perú. El objetivo del presente trabajo fue establecer un protocolo estandarizado de obtención de inóculos virales inactivados de FAdV-4 y FAdV-8b producidos en células de hepatoma de pollo (LMH). Para ello, células LMH al 70 % de confluencia,crecidas en medio DMEM con 10 % de suero fetal bovino, fueron infectadas con FAdV-4 o FAdV-8b para evaluar el valor de multiplicidad de infección (MOI) y tiempo de cosecha óptimos. Luego, se realizó la producción de 1L de ambos serotipos considerando un MOI de 10 y tiempo de cosecha de 96 h post-infección (hpi). Seguidamente, ambas cosechas virales fueron clarificadas y concentradas mediante ultrafiltración tangencial (UFT) en membrana de 100kDa e inactivadas con 30mM de etilenimina binaria (BEI) a 37°C por 18 h. La pérdida de infectividad fue corroborada por el cálculo de dosis infecciosa del 50 % de cultivo de células (TCID50). Nuestros resultados mostraron que con un MOI de 10 y cosecha de 96 hpi se alcanzó el mayor título viral (> 1x108 TCID50/mL). Además, se mostró que la UFT permitió concentrar 10 veces la cantidad de virus con una recuperación del 91% y que la inactivación con BEI fue eficiente. Los inóculos inactivados obtenidos pueden ser utilizados en la formulación de una vacuna para prevenir IBH y HHS en pollos de forma segura. Avian adenovirus type 1 (FAdV) is considered an important pathogen for the poultry industry. Serotypes 4 (FAdV4) and 8b (FAdV-8b) are responsible for Inclusion Body Hepatitis (IBH) and Hydropericardium Syndrome (HHS) in chickens and are prevalent in Perú. The objective of this work was to establish a standardized protocol for obtaining inactivated viral inoculum of FAdV-4 and FAdV-8b produced in chicken hepatoma (LMH) cells. For this, LMH cells at 70 % confluence, grown in DMEM medium with 10 % fetal bovine serum, were infected with FAdV-4 or FAdV-8b to evaluate the optimal multiplicity of infection (MOI) value and harvest time. Then, the production of 1L of both serotypes was carried out considering an MOI of 10 and a harvest time of 96 h postinfection (hpi). Next, both viral harvests were clarified and concentrated by tangential ultrafiltration (UFT) on a 100kDa membrane and inactivated with 30mM Binary Ethyleneimine (BEI) at 37°C for 18 h. Loss of infectivity was corroborated by calculating the 50 % cell culture infectious dose (TCID50). Our results showed that with an MOI of 10 and a harvest time of 96 hpi, the highest viral titer was reached (> 1x108 TCID50/mL). In addition, it was shown that UFT allowed concentrating 10 times the amount of virus with a 91% recovery rate and that inactivation with BEI was efficient. The inactivated inoculum obtained can be used in the formulation of a vaccine to safely prevent IBH and HHS in chickens. EEA Balcarce Fil: Flores Santos, Juan Carlos. Quimtia, Desarrollo e investigación; Perú. Fil: Quispe, Juana. Quimtia, Desarrollo e investigación; Perú. Fil: Huberman, Yosef Daniel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina. Fil: Mendoza Espinoza, Alfredo. Quimtia, Desarrollo e investigación; Perú. Fil: Caballero García, Melani. Quimtia, Desarrollo e investigación; Perú. 2022-09-15T10:22:21Z 2022-09-15T10:22:21Z 2022-08-01 info:ar-repo/semantics/artículo info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion http://hdl.handle.net/20.500.12123/12883 https://www.someve.com.ar/images/revista/2022/Vol103(3)/Pag-100-106-Flores-Santos.pdf 1852-771X spa info:eu-repo/semantics/openAccess http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International (CC BY-NC-SA 4.0) application/pdf Sociedad de Medicina Veterinaria, Argentina Revista de Medicina Veterinaria 103 (3) : 100-106 (agosto 2022) |
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