Use of Chelex-100 for the molecular diagnosisof five animal pathogens
Molecular tools have improved conventional veterinary diagnosis. Acid nucleic extraction is a key step for downstream applications. This work aimed to compare the DNA extraction method Chelex-100 resin (M1) with Whatman® cards (M2), phenol-chloroform (M3),or commercial kits (M4...
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| Formato: | info:ar-repo/semantics/artículo |
| Lenguaje: | Inglés |
| Publicado: |
Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional del Litoral
2021
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | http://hdl.handle.net/20.500.12123/11024 https://bibliotecavirtual.unl.edu.ar/publicaciones/index.php/FAVEveterinaria/article/view/9724 https://doi.org/10.14409/favecv.v20i1.9724 |
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|---|---|
| author | Tomazic, Mariela Luján Hamer, Micaela Bustos, Carla Paola Arregui, Matias Ezequiel Ascencio, Mariano Saraullo, Vanina Rosa Watanabe, Olivia Brihuega, Bibiana Felicitas Rodriguez, Anabel Elisa Grune Loffler, Sylvia |
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| collection | INTA Digital |
| description | Molecular tools have improved conventional veterinary diagnosis. Acid nucleic extraction is a key step for downstream applications. This work aimed to compare the DNA extraction method Chelex-100 resin (M1) with Whatman® cards (M2), phenol-chloroform (M3),or commercial kits (M4), and to determine the most sensitive and inexpensive one for its diagnosis of animal pathogens that, despite their economic or zoonotic relevance, receive little attention. DNA was isolated from urine, organs, semen, blood and intestinal mucous, from the bacteria Leptospira interrogansserovar Pomona Pomona (by M1 and M2), Brucella melitensis(by M1, M3 and M4), and Salmonellaser. Abortusequi (by M1 and M4), and the parasites Leishmaniaspp. (by M1, M3 and M4), and Eimeria spp. (byM1 and M3), respectively. The sensitivity of each method was assayed by Polymerase Chain Reaction (PCR). The M1 showed similar sensitivity for Salmonellaser. Abortusequi, Leishmaniaspp., and Eimeriaspp., being better for L. interrogansserovar Pomona Pomona and slightly lower for B. melitensis. For the first time, a simple and economic method was successfully employed for extracting DNA from these animal pathogens, especially important in low-resource settings, contributing to the diagnosis of leptospirosis, brucellosis, leishmaniasis, and coccidiosis; as well as to the molecular epidemiology of salmonellosis in stallion from semen samples. |
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| institution | Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA -Argentina) |
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| publishDate | 2021 |
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| publisher | Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional del Litoral |
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| spelling | INTA110242021-12-30T14:56:40Z Use of Chelex-100 for the molecular diagnosisof five animal pathogens Tomazic, Mariela Luján Hamer, Micaela Bustos, Carla Paola Arregui, Matias Ezequiel Ascencio, Mariano Saraullo, Vanina Rosa Watanabe, Olivia Brihuega, Bibiana Felicitas Rodriguez, Anabel Elisa Grune Loffler, Sylvia Enfermedades de los Animales Control de Enfermedades Diagnóstico PCR Leptospira Brucella Salmonella Animal Diseases Disease Control Diagnosis Chelex-100 Molecular tools have improved conventional veterinary diagnosis. Acid nucleic extraction is a key step for downstream applications. This work aimed to compare the DNA extraction method Chelex-100 resin (M1) with Whatman® cards (M2), phenol-chloroform (M3),or commercial kits (M4), and to determine the most sensitive and inexpensive one for its diagnosis of animal pathogens that, despite their economic or zoonotic relevance, receive little attention. DNA was isolated from urine, organs, semen, blood and intestinal mucous, from the bacteria Leptospira interrogansserovar Pomona Pomona (by M1 and M2), Brucella melitensis(by M1, M3 and M4), and Salmonellaser. Abortusequi (by M1 and M4), and the parasites Leishmaniaspp. (by M1, M3 and M4), and Eimeria spp. (byM1 and M3), respectively. The sensitivity of each method was assayed by Polymerase Chain Reaction (PCR). The M1 showed similar sensitivity for Salmonellaser. Abortusequi, Leishmaniaspp., and Eimeriaspp., being better for L. interrogansserovar Pomona Pomona and slightly lower for B. melitensis. For the first time, a simple and economic method was successfully employed for extracting DNA from these animal pathogens, especially important in low-resource settings, contributing to the diagnosis of leptospirosis, brucellosis, leishmaniasis, and coccidiosis; as well as to the molecular epidemiology of salmonellosis in stallion from semen samples. Las técnicas moleculares han contribuido a mejorar el diagnóstico veterinario tradicional y la extracción de ácidos nucleicos es determinante. El objetivo de este trabajo fue comparar el método de extracción de ADN Chelex-100 (M1) con papel Whatman (M2), fenol-cloroformo (M3) o kits comerciales (M4), y determinar un método sensible y de bajo costo para el diagnóstico de patógenos de animales económica o zoonóticamente relevantes y que reciben poca atención. A partir de orina, órganos, semen, sangre y mucosa intestinal se extrajo el ADN de las bacterias Leptospira interrogans serovar Pomona Pomona (con M1 y M2), Brucella melitensis (con M1, M3 y M4), Salmonella ser. Abortusequi (M1 y M4), y de los parásitos Leishmania spp. (M1, M3 y M4) y Eimeria spp. (M1 y M3), respectivamente. La sensibilidad de los protocolos fue analizada por PCR. El método M1 demostró una sensibilidad similar para S. Abortusequi, Leishmania spp. y Eimeria spp., siendo mejor para L. interrogans y levemente menor para B. melitensis. Por primera vez se usó exitosamente en estos patógenos veterinarios un método simple y económico para extraer ADN, especialmente importante en laboratorios de bajos recursos económicos, contribuyendo al diagnóstico de leptospirosis, brucelosis, leishmaniasis y coccidiosis, así como también a la epidemiología molecular de salmonelosis en muestras de semen de caballos. Instituto de Patobiología Fil: Tomazic, Mariela Luján. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; Argentina Fil: Tomazic, Mariela Luján. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Tomazic, Mariela Luján. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Cátedra de Biotecnología; Argentina Fil: Hamer, Micaela. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; Argentina. Fil: Hamer, Micaela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Bustos, Carla Paola. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Enfermedades Infecciosas; Argentina Fil: Arregui, Matias Ezequiel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; Argentina Fil: Arregui, Matias Ezequiel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Ascencio, Mariano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; Argentina Fil: Ascencio, Mariano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Saraullo, Vanina Rosa. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; Argentina. Fil: Saraullo, Vanina Rosa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Watanabe, Olivia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; Argentina. Fil: Watanabe, Olivia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Brihuega, Bibiana Felicitas. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; Argentina. Fil: Brihuega, Bibiana Felicitas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Rodriguez, Anabel Elisa. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; Argentina. Fil: Rodriguez, Anabel Elisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Grune Loffler, Sylvia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; Argentina. Fil: Grune Loffler, Sylvia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina 2021-12-30T14:53:18Z 2021-12-30T14:53:18Z 2021-06 info:ar-repo/semantics/artículo info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion http://hdl.handle.net/20.500.12123/11024 https://bibliotecavirtual.unl.edu.ar/publicaciones/index.php/FAVEveterinaria/article/view/9724 2362-5589 1666-938X https://doi.org/10.14409/favecv.v20i1.9724 eng info:eu-repograntAgreement/INTA/2019-PE-E8-I170-001/2019-PE-E8-I170-001/AR./Abordaje integral para la mejora de la calidad de vida: el hábitat y las condiciones socioproductivas para el arraigo de las familias productoras. info:eu-repograntAgreement/INTA/2019-PD-E5-I103-001/2019-PD-E5-I103-001/AR./Desarrollo de tecnologías diagnósticas y estudios epidemiológicos para el control de enfermedades que afectan la producción animal y la salud pública info:eu-repo/semantics/openAccess http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International (CC BY-NC-SA 4.0) application/pdf Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional del Litoral FAVE Sección Ciencias Veterinarias 20 (1) : 26-33. (junio 2021) |
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