Evaluación de dos métodos de extracción de la bacteria simbionte Photorhabdus luminescens del nematodo entomopatógeno Heterorhabditis bacteriophora - Arias Y., Maximo B.; Murillo P., Mirta A. (Zamorano: Escuela Agrícola Panamericana, 2013., 2013)
El nematodo entomopatógeno Heterorhabditis bacteriophora es un parásito natural de insectos del género Coleóptera, Díptera, Lepidóptera, Ortóptera y Sifonáptera, el cual al ingresar al cuerpo libera una bacteria que es la responsable de causar la muerte de estos insectos. El nematodo presenta una simbiosis muy especial con la bacteria Photorhabdus luminescens, que produce antibacterianos que preserva el insecto mientras el nematodo se desarrolla dentro del insecto. El objetivo de este estudio fue evaluar y definir parámetros para la extracción de la bacteria simbionte Photorhabdus luminescens a través de dos métodos, el primero la maceración de nematodos extraídos de larvas infestadas con el nematodo y el segundo por la extracción de la hemolinfa de larvas de Galleria mellonella infectadas con la bacteria; también determinar la patogenicidad de la bacteria producida en medios de cultivo artificiales a partir de los métodos de macerado y hemolinfa. Para el método de aislamiento por macerado se maceraron 20,000, 40,000 y 80,000 nematodos. En el método de hemolinfa se evaluaron tres lugares de extracción 2°-3°, 6°-7°, 10°-11° inter segmento de larvas infectadas. Se utilizó un diseño completamente al azar (DCA), se evaluaron tres tratamientos con tres repeticiones, las medias se separaron usando DUNCAN. Para el bioensayo de patogenicidad se infectaron diez larvas de Galleria mellonella con tres diferentes concentraciones de la bacteria aislada por los métodos anteriores. Las concentraciones usadas fueron la tercera, sexta y novena dilución de la bacteria, se evaluó el porcentaje de mortalidad de larvas de Galleria mellonella a las 48 horas después de la exposición. En el bioensayo se utilizó un diseño completamente al azar con arreglo factorial de dos métodos con tres concentraciones y se realizó una separación de medias usando LSMEANS. El tratamiento de macerado de 20,000 nematodos presentó el mayor número de colonias aisladas en comparación con los otros tratamientos y el tratamiento de extracción de la hemolinfa del 6° y 7° inter segmento presentó el mayor número de colonias aisladas. En el bioensayo se observó la eficiencia patogénica de la bacteria producida en medios artificiales, se determinó mayor porcentaje de mortalidad de Galleria mellonella por la bacteria aislada del método de macerado.