Producción de antígenos de hemoparásitos para la técnica de inmunofluorescencia indirecta. - Vizcaino Gerdts, O.G. (Instituto Colombiano Agropecuario - ICA, 2018)
El método del frotis para la técnica de inmunofluorescencia, ha sido utilizado tradicionalmente para la obtención de antígenos de hemoparásitos (a. marginale, Babesia y Trypanosoma), tiene el inconveniente de requerir una parasitémia alta (más del 15 por ciento) para obtener adecuada concentración de los mismos en el frotis. La sangre obtenida de una parasitemia alta (infección in vivo) puede tener incrementado el complejo antigeno - anticuerpo lo cual la hace inadecuada porque el antígeno daría reacciones inespecificas. Un método para obtener una concentración uniforme, de parásitos ya que la sangre se diluye a una solución previamente determinada según un cierto número de parásitos, es utilizando la técnica de la Dilución y Concentración en Gota la cual tiene la ventaja de no requerir una parasitemia alta (0.5 a 1 por ciento) la cual puede obtenerse en el primer osegundo día de patencia, cuando el sistema inmunológico del animal no ha sido suficiente estimulo. La obtención de sangre infectada por cultivo in vitro mejora el método de la Dilución y Concentración en Gota, porque el cultivo el factor inmunológico no interfiere en forma alguna. Se detallan los procedimientos para la preparación del antígeno de A. marginale y de Babesia respectivamente. En el caso de los Tripanosomas que son organismos extracelulares, no se aplica el método de las diluciones. Estos organismos se concentran por la técnica de Woo en la interfase entre glóbulos blancos y el plasma. Por esta técnica se obtiene un mayor volumen de plasma con tripanosomas (0.5 ml a 1.0 ml) que el obtenido en tubo capilar, centrifugando 5 ml de sangre infectada en tubo de ensayo a 1.500 r.p.m. durante 15 minutos y obteniendo el sobrenadante que esta por encima de la interfase globulos-plasma. En la preparación del antígenoen láminas se aplica una pequeña gota de PBS, Ph 7.2, 0.16 M, en cada uno de los círculos de las láminas.;El PBS se seca durante 45 minutos en estufa a 40 grados centígrados y permite al tripanosoma una mayor adherencia. Se aplica luego una gota del sobrenadante que contiene los tripanosomas y se seca como con PBS. El antígeno de fija durante 3 minutos en metanol. Luego las láminas de antígeno después de fijadas y secas se empacan en papel de aluminio y se preservan por congelación de menos 40 a menos 80 grados centígrados