Determinación del umbral de detección de Pseudococcus viburni (Hemiptera: Pseudococcidae) por PCR - Vera Macaya, Diana Lorena; Garrido, Silvina Alejandra; Aun, Elizabeth De Los Angeles; Lago, Jonatan; Cichon, Liliana (Sociedad Entomológica Argentina, 2024)
La cochinilla harinosa de los frutales Pseudococcus viburni (Signoret) es una plaga cuarentenaria, presente en el Alto Valle de Río Negro y Neuquén, Argentina. Su detección durante la fiscalización aduanera, aun en los estados inmaduros, provoca rechazos de la fruta fresca argentina con destino a los mercados internacionales. Las técnicas actuales de identificación de pseudocóccidos y otros cocoideos implican la realización de preparados microscópicos que requieren varios días. Por esto, la disminución de los tiempos de identificación es importante sobre todo en las tareas de fiscalización. En este trabajo, se determinó el umbral de detección específica de P. viburni mediante PCR, como así también, la implementación de un método rápido de extracción de ADN mediante DNAzol™. Insectos de diferentes estados de desarrollo (huevo, ninfas (tres estados ninfales) y adulto), conservados en etanol pro análisis a -20 ºC, provenientes de montes frutales del Alto Valle, Argentina, fueron procesados según el protocolo del fabricante y se logró obtener ADN de buena calidad y concentración. Una alícuota del mismo fue utilizado como templado para una reacción de PCR usando primers específicos para P. viburni, registrados en bibliografía y como control positivo ADN de P. viburni de colección entomológica. Los primers utilizados y sus secuencias son A4 (5’-cccgcggccgttctctcttt-3’) y A5 (5’-tatgttgtgcatagttgtgtgtgcgc-3’), diseñados por Beuning et al. (1999). La amplificación generó una banda de peso molecular esperado de 650 pb. en gel de agarosa al 1.5% en todos los estadios, se determinó como límite de detección el estado de huevo. Esta técnica constituye una detección específica de P. viburni en un lapso máximo de 48 h.