Caracterización parcial de un virus isométrico aislado de papa - Muller, G. (International Potato Center, 1996)
La papa (Solanum tuberosum L.) es originaria de la región andina de Sudamérica, donde puede encontrarse una gran diversidad de especies y cultivares. Actualmente la papa ocupa el cuarto lugar en lo que a producción mundial se refiere, ubicándose detrás del trigo, el arroz y el maíz. La papa es considerada el alimento base y cumple un rol preponderante en la erradicación del hambre en el mundo, por ser una altenativa económica. Las pérdidas en producción y calidad pueden ser considerables, debido a enfermedades. Entre las enfermedades mas importante que atacan al cultivo de papa estan las causadas por virus. Muestras de papa de la variedad Tomasa Tito Condemayta, provenientes de Arequipa que fueron expuestas al psilido Russelliana solanicola T. fueron llevadas al Centro Internacional de la Papa (CIP) para ser analizadas. Inoculando especies indicadoras con la savia de las plantas; mostrando sintomas de mosaico sistémico, ampollamiento y encarrujamiento de hojas en la especie Nicotiana benthamiana Domin., mosaico sistémico en Nicotiana debneyii Domin. y Nicotiana occidentalis Whuler., manchas necróticas y anillos necróticos en Nicotiana tabacum L. cv. Samsum.; Anillos necróticos y mosaico en Nicotiana clevelandii Gray; puntos cloróticos y deformación foliar en Chenopodium amaranticolor Coste & Reyn.; e infección asintomática en otras especies como Physalis floridana Rydb., Capsicum annum L., Licopersicon esculentum Mill. cv. Rutgers. Observaciones al microscópio electrónico mostraron la presencia de un sólo tipo de particulas virales de tipo isométrico, al que se codificó como SB-26. El SB-26 pudo transmitirse mecânicamente, utilizando solamente agua destilada para la maceración. Su rango de hospedantes se restringió a la familia Solanaceae y Chenopodaceae. No se logró transmitir por contacto; como tampoco se logró transmitir a través de áfidos, mientras que si hubo resultados positivos en latransmisión por el psilido en uno de los tratamientos correspondientes a 24 horas de adquisición y tres días de inoculación, utilizando de 10-15 insectos por planta. Los valores de PFD (punto final de dilución), PIT (punto de inactivación térmica), y LIV (longevidad in vitro) se determinaron en la especie N. benthamiana Domin. como planta de prueba, obteniéndose valores de 10-10; 55°C -60°C y menor a 7 días respectivamente; caracteristicas que coinciden con dos grupos de virus isométricos, los bromovirus y los cucumovirus.El SB-26 se purificó a partir de hojas de N. benthamiana Domin. tomando como base el protocolo de purificación del CIP para el virus del enrrollamiento de la hoja de papa (PLRV) con ciertas modificaciones. El rendimiento obtenido fluctuó entre 2- 5 mg/Kg. de tejido infectado. El virus asi obtenido fue suficiente para producir un antisucro especifico contra el SB-26 mediante inyección intravenosa a un conejo. El virus se mantuvo infectivo después de purificado; esto se comprobó inoculando plantas de N. benthamiana Domin. con preparaciones del virus purificado. La concentración final del extracto viral se determinó usando un coeficiente de extinsión promedio para virus isométricos e igual a 5.1. El antisuero obtenido se tituló por NCM-ELISA obteniéndose un titulo de 1/6000 para el antisuero crudo y 1/4000 para la IgG purificada. Se realizaron varios ensayos con diferentes buffers de maceración en esta técnica para muestras de papa, ya que hay cierto problema con la detección de virus en plantas de campo debido entre otras razones a la baja concentración del virus en las plantas y/o al enmascaramiento de la reacción por inhibidores (sustancias oxidantes, u otros virus presentes en las mismas plantas). Se intentó titular el antisuero por DAS- ELISA en varias oportunidades (diferentes preparaciones de conjugados, IgGs y muestras), siendo los resultados en todos los casos infructuosos, debido a problemas en la conjugación. Asimismo, el antisuero fue probado por NCM-ELISA contra otros virus tanto isométricos como alargados disponibles en el CIP, no encontrándose relación serológica alguna con ninguno de ellos. Se calculó el tamaño de las partículas en 30.5 nm de diámetro. La determinación del peso molecular y tipo de ácido nucleico se vio limitada por la inestabilidad del virus ya que después de la purificación pierde un alto porcentaje de su ácido nucleico lo que sumado a las pérdidas normales durante el proceso de extracción del ácido nucleico concluian en la pérdida total del mismo lo que impedía realizar las pruebas de determinación del tamaño por no tener suficiente cantidad de ácido nucleico.Debido a la falta de datos experimentales aún no se puede definir el grupo al que pertenece el virus SB-26. Asignar un nombre por ahora podría causar confusión en el futuro. Se sugiere por lo tanto denominarlo el virus SB-26 hasta su confirmación posterior.